根据您的描述,如果您上个月21号和25号同房并没有采取措施进行避孕,那么有可能怀孕。试纸是一种简便的测孕方法,一般在预计月经来临前一周左右使用可以获得较准确的结果。然而,孕早期的HCG水平可能较低,有时可能无法被试纸检测出来。因此,如果您在预计月经来临前使用试纸测出一条杠,这通常意味着您可能没有怀孕。然而,为了获得更准确的结果,建议您在预计月经来临当天或之后再次使用试纸进行测量。另外,熬夜可能会对月经周期产生一定影响,但并不是直接导致怀孕的原因。如果您有进一步的疑问或需要咨询其他健康问题,请继续向我提问。