精子凝集试验从最初由 Kibrik等(1952年)创立的白明胶内精子凝集试验开始连同其后的发展,一共有 4 种:
① 明胶凝集试验(Kibrik,1952);
② 试管玻片凝集试验(Franklin,Dukes,1964);
③ 毛 细 管 凝 集 试 验(Shulman,Hekman,Pann,1971);
④ 浅 盘 凝 集 试 验(Friberg,1974)。
精子在明胶内均匀分散,若以黑纸作背面对光观察,呈均匀乳白色,不见凝集块。
异常结果:精子成小凝集块,对光观察可见小凝集块有如雪花纷飞状可诊断为精子凝集症。
需要检查的人群:精子凝集症的不育患者。
不合宜人群:暂时未明。
检查前禁忌:
1、 留精液前,病人应停止性交4~7天。检查前1周不能用丙酸睾丸酮、苯乙酸睾丸酮、苯丙酸诺龙。检查前1个月内应停止饮酒,这点必须做到。
2、 采取精液时,可用软皂或石蜡油做阴茎按摩,将标本收集在无菌的试管中;也可用避孕套(冲洗干净,不含杀精子药物)或采用性交中断法收集精液,但这样收集的量往往不多。
3、如用上述方法采不到精液,可经直肠内按摩精囊及输精管末端、压迫采尿,检查沉渣中有无精子。
4、 不要将精液暴露在过热和过冷的环境中。及时交给医生备查,不得超过30分钟。冷天要注意保暖,送检时可放在内衣口袋里保温。
5、如果要进行细菌培养,应先冲洗、消毒尿道口,再将精液收集在无菌试管中。
检查时要求:积极配合医生工作。
明胶凝集试验(gelatin agglutination test,GAT)
【准备】
(1)配制 Baker液(Bakersolution)
葡萄糖3.00gNa2HPO4·7H2O0.46g
NaCl0.20gKH2PO40.01g
加双蒸水至 100mL。
(2)用 Baker液配制 10% 白明胶溶液,并置 37℃ 水浴中备用。
(3)精子悬浮液:取正常新鲜精液(精子密度为 80×106/mL 左右,活动率 >60% ,a、b两级活动精子 >70% ),室温液化,用 Baker液稀释至 40×106/mL,置 37℃ 水浴中保存备用。
(4)待检血清及对照血清处理,均经 56℃ 水浴加热 30min,以灭活补体。随后用 Baker液,将两种血清均作 1∶4~ 1∶32倍数稀释,存放于 37℃ 水浴中备用。
【方法】
(1)取一定量的精子悬浮液,加入等量的 10% 明胶溶液,充分混合后,取 0.3mL 分别加入装有 0.3mL 对倍稀释血清的各支小试管内,并使其充分混合。
(2)将混合液分别用毛细吸管移置另一小试管(3mm ×30mm)内,37℃ 孵育 2h,移置 4℃放置 5min,待明胶凝固后,观察明胶内精子凝集情况,并判断结果。
【判断】
(1)阴性:精子在明胶内均匀分散,若以黑纸作背面对光观察,呈均匀乳白色,不见凝集块。
(2)阳性:精子成小凝集块,对光观察可见小凝集块有如雪花纷飞状,不难鉴别。
(3)抗体效价:以阳性反应的最高血清稀释倍数为血清凝集抗体效价。