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化验检查
β-内酰胺酶
介绍:

  

  β-内酰胺酶是指能催化水解生物分子中β -内酰胺环中的的酰胺键的灭活酶。细菌产生β- 内酰胺酶是细菌对β -内酰胺类抗生素耐药的主要机制。

  β- 内酰胺酶类抗生素包括青霉素类 ,头孢菌素类 ,非典型 β- 内酰胺类等 ,是品种最多 ,研究进展最快 ,临床应用最广泛的一大类药物。

正常值:

  

  体内菌群的种类和比例正常,人体处于动态平衡。

临床意义:

  

  细菌耐药性的机制:1. 灭活酶——主要为 β 内酰胺酶 (2 0 0多种) ,使抗生素失效。2. 靶位改变——与抗生素结合靶位的改变 ,使抗生素作用下降。3.细菌膜通透性的改变——使抗生素不能或很少进入细菌体内到达作用靶位。

  细菌耐药性的发展从医院内菌株(如肠杆菌科、金黄色葡萄球菌)到医院外菌株(如肺炎链球菌、化脓性链球菌、淋球菌),其耐药性从对单种药物耐药发展至多重耐药,例如金黄色葡萄球菌对青霉素耐药;ESBL菌株对多种常用抗生素耐药。

  异常结果: 肠杆菌科、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、淋球菌等感染但是用抗生素无效或者效果不明显,细菌产生耐药性。

  需要检查的人群: 有上述情况的患者

注意事项:

  

  不合宜人群: 没有

  检查前禁忌:注意正常的生活饮食习惯,注意个人卫生。

  检查时要求:积极配合医生

检查过程:

  

  β-内酰胺酶的检测

  临床标本中分离金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌以及最近发现的肠球菌属少数菌株对青霉素、氨苄青霉素出现耐药。由于上述菌株产生 β-内酰胺酶水解前述抗生素。检测该酶有下列方法:

  (一)微生物活性消失法

  此法是以一株对青霉素高度敏感的枯草芽胞杆菌的指示菌,如待检菌株产生β内酰胺酶,破坏了青霉素,则在划线两边有枯草芽胞菌生长,否则指示菌仍呈很大抑菌环。

  (二)淀粉-碘测定法

  β内酰胺酶破坏β内酰胺环,碘与被打开β内酰胺环结合,使蓝色的淀粉-碘复合物转变成无色。

  方法:用pH6.0磷酸缓冲液配制青霉素悬液 6000μg/ml,取该液0.1 ml置于微量稀释板凹孔中,挑选检测菌株数个菌落混悬于其中,摇动30min,静置室温中1h,加淀粉液2滴,再加碘液1滴,混合,立即观察颜色变化,阳性者当加入碘液后,首先立即出现蓝色、如在10min内消失蓝色,提示该菌产生β-内酰胺酶。

  (三)酸测量法

  青霉素被β-内酶胺酶水解后成青霉素酸,pH值下降6.8以下,用酚红指示剂,由红(紫)色 (原液:枸橼酸缓冲液pH8.5) → 黄色(pH6.8以下)。

  (四)头孢硝基噻吩显色反应

  头孢硝基噻吩(Nitrocefin)的β-内酰胺环被β-内酰胺酶打开,基质由黄色变成红色。

  液体方法:10mg头孢硝基噻吩溶解于lml的二甲基亚砜中,然后用0.1mol/L PBS(pH7.0)再稀释 1:20,最后浓度为500μg/m1,溶液呈黄或淡橙色,保存4~10℃,可用几个星期。取该溶液0.05ml置放于微量稀释板凹孔中或小试管中,挑取被试菌落,制成浓厚悬液,与凹孔中基质液混和,室温10~ 30min,头孢硝基噻吩由黄变成红色为阳性,若显色不明显,观察可延长6h。

  有报道纸片法用于流感嗜血杆菌和淋病奈瑟菌检测β-内酰胺酶的结果是准确的,但对于某些菌株产生少量而与菌细胞紧密结合的β-内酰胺酶,如腐生葡萄球菌等,用液体法检测更好。上述任何一种检测方法都应用质量控制。

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